PCR技术中为什么不用解旋酶
ʱ䣺 2019-10-08

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  1、解旋酶一般只能打开很短一部分的DNA双螺旋,在具体PCR操作的时候无法控制其具体在什么时间。

  2、不能保证DNA解旋酶解开DNA的那段时间足够长以便让引物和模板结合,而且引物和模板结合后,解旋酶还能立刻移开以免阻碍DNA合成酶的前进。

  聚合酶链式反应为一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。

  1、DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。

  2、退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。

  3、延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。

  解旋酶一般只能打开很短一部分的DNA双螺旋,在具体PCR操作的时候无法控制其具体在什么时间打开那一段DNA,更无法控制其具体能作用多少时间。中秋阖月吉利嘉际来承载家人!详细一点说,我们没有办法知道DNA解旋酶打开的是模板DNA与引物结合的部分,还是不结合的部分,还是干脆分开了和模板结合的引物;我们也不能保证DNA解旋酶解开DNA的那段时间足够长以便让引物和模板结合,而且引物和模板结合后,解旋酶还能立刻移开以免阻碍DNA合成酶的前进;我们更没法让DNA在复制的过程中,DNA解旋酶一直走在复制叉的前方来帮助DNA复制等等。有很多不可控的因素使得我们现阶段不可能在体外让DNA解旋酶按照我们希望的模式来工作。在细胞内,解旋酶需要DNA复制复合物(下图)的帮助才可以精密地调节DNA的复制,在体外实验中,每多引入一种蛋白质就会让实验体系更加复杂、更加难以控制、更加高成本,所以DNA变性的工作就都交给高温了。

  展开全部pcr仪其实就是一个高级的“电炉子”,它可以瞬间的升高或降低温度,大约每秒种6摄氏度。第一步:高温解旋,大约加温到90多度吧(大概是),DNA双链氢键断裂瞬间解旋第二步:退火,你应该听说过吧,PCR仪大约在十秒之内吧温度降到60多度,这时“引物”会抢在双链形成氢键之前结合上去。

  第三步:dNMP开始结合上去,合成开始了,都是5端向3端进行,不会出现冈奇片断,因为DNA已经解开了,哈哈

  展开全部DNA双链的解旋是边解旋边复制,单链不能存在很长时间就复性了。而且解旋酶在体外作用的条件也比较负责,成本比较高。pcr的意义在于大量的得到gene拷贝,还是高温变性效果稳定,成本低。